|
|
||
|
РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК ИНСТИТУТ ЦИТОЛОГИИ
А. А.МИРОНОВ, Я. Ю. КОМИССАРЧИК, В. А.МИРОНОВ
МЕТОДЫ ЭЛЕКТРОННОЙ МИКРОСКОПИИ В БИОЛОГИИ И МЕДИЦИНЕ
Ответственный редактор Н. Н. Никольский
ПРЕДИСЛОВИЕ
1.1. ВЗЯТИЕ МАТЕРИАЛА
1.2. ХИМИЧЕСКАЯ ФИКСАЦИЯ
1.3. ХИМИЧЕСКИЕ ФИКСАТОРЫ
1.3.1. Характеристика фиксаторов
1.3.1.1. Четырехокись осмия (ЧО)
1.3.1.1.1. Режим использования
1.3.1.1.2. Приготовление растворов
1.3.1.2. Глютаральдегид (ГА)
1.3.1.2.1. Механизмы действия
1.3.1.2.2. Режим использования
1.3.1.2.3. Состав коммерческих растворов ГА
1.3.1.3. Формальдегид (ФА)
1.3.1.4. Акролеин
1.3.2. Выбор фиксаторов
1.3.3. Буферные растворы
1.3.4. Осмотическое давление
1.3.4.1. Промывание
1.3.5. Способы химической фиксации
1.3.5.1. Перфузионная фиксация
1.3.5.1.1. Отмывание
1.3.5.1.2. Введение фиксатора
1.3.5.2. Иммерсионная фиксация
1.3.5.3. Инъекция
1.4. МИКРОВОЛНОВОЕ ИЗЛУЧЕНИЕ (МВИ)
1.4.1. Механизмы действия МВИ
1.4.2. Устройства для МВИ
1.4.3. Режимы фиксации
1.4.4. Температурный режим фиксации
1.5. ФИКСАЦИЯ И ИММУНО-ЭМ
1.5.1. Требования к фиксации
1.5.2. Блокирование остаточных альдегидных групп
1.6. ОСОБЕННОСТИ ФИКСАЦИИ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ КЛЕТОК
1.7. ХРАНЕНИЕ ФИКСИРОВАННОГО МАТЕРИАЛА
1.8. АРТЕФАКТЫ 1.8.1. Артефакты, возникающие при взятии материала
1.8.2. Артефакты, возникающие при фиксации
1.8.3. Артефакты, связанные с иммерсионной фиксацией
1.8.4. Артефакты, обусловленные постфиксацией
2.1. МЕХАНИЗМЫ ЗАМОРАЖИВАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТОВ
2.2. МЕТОДЫ БЫСТРОГО ЗАМОРАЖИВАНИЯ
2.2.1. Использование криогенов
2.2.2. Использование принципа пульверизатора
2.2.3. Метод "сандвича"
2.2.4. Метод холодного блока
2.2.5. Замораживание под давлением
2.3. КРИОПРОТЕКТОРЫ
2.4. ЗАМОРАЖИВАНИЕ ОБЪЕКТОВ ПРИ КРИОУЛЬТРАТОМИИ
3.1. ПРОМЫВАНИЕ
3.2. ОБЕЗВОЖИВАНИЕ
3.2.1. Дегидратанты
3.3. ЗАЛИВОЧНЫЕ СРЕДЫ (ЗС)
3.3.1. Сравнительная характеристика ЗС
3.3.2. Эпоксидные смолы
3.3.2.1. Аралдит
3.3.2.2. Эпон
3.3.2.3. Смеси Эпона и Аралдита
3.3.2.4. Смола Сперра
3.3.3. Полиэфирные смолы
3.3.4. Водорастворимые заливочные среды
3.3.5. Другие заливочные среды
3.3.5.1. Полиэтиленгликоль (ПЭГ)
3.4. ПРОПИТЫВАНИЕ И ПОЛИМЕРИЗАЦИЯ
3.4.1. Перемешивание ЗС
3.4.2. Хранение заливочных сред
3.5. РЕГУЛЯЦИЯ ТВЕРДОСТИ БЛОКОВ
3.6. ЕМКОСТИ ДЛЯ ПОЛИМЕРИЗАЦИИ
3.7. ОРИЕНТАЦИЯ ОБЪЕКТОВ
3.8. РЕЖИМЫ ПОЛИМЕРИЗАЦИИ
3.8. ЗАМЕЩЕНИЕ В ЗАМОРОЖЕННОМ СОСТОЯНИИ
3.8.1. Принцип метода
3.8.1.1. Замещающие жидкости
3.8.1.2. Применяемые фиксаторы и рекомендуемые схемы
3.9. АРТЕФАКТЫ ПРЕПАРИРОВАНИЯ
3.9.1. Артефакты, возникающие при обезвоживании
3.9.2. Артефакты, возникающие при заливке
4.1. СМОЛЫ ДЛЯ НИЗКОТЕМПЕРАТУРНОЙ ЗАЛИВКИ
4.2. ОСОБЕННОСТИ РАБОТЫ С РАЗЛИЧНЫМИ АКРИЛОВЫМИ СМОЛАМИ
4.2.1. Сравнительный анализ
4.2.1.1. Ловикрилы
Таблица 1. Состав смол ловикрилового ряда.
|
К4М |
КИМ |
НМ20 |
НМ23 |
|
- |
12.2 |
33.9 |
|
|
- |
4.8 |
- |
5.4 |
|
- |
11.2 |
- |
- |
|
- |
- |
68.5 |
60.7 |
|
9.0 |
- |
16.6 |
- |
|
23.7 |
20.6 |
- |
- |
|
48.0 |
41.0 |
- |
- |
|
- |
10.2 |
- |
- |
|
13.9 |
- |
14.9 |
- |
Таблица 2. Свойства ловикрилов
|
Свойства |
Температура инфильтрации,®С |
|
|
рекомендуемая |
минимальная |
|
|
Полярная |
-35 |
-43 |
|
Неполярная |
-40 |
-53 |
|
Полярная |
-60 |
-63 |
|
Неполярная |
-80 |
-83 |
4.2.1.1.1. Состав смол
4.2.1.2. ЛР-смолы
4.2.1.2.1. ЛРВайт
4.2.1.2.2. ЛРГолд
4.2.1.2.3. Гликольметакрилат (ГМА)
4.2.2. Активаторы
4.3. МЕТОДЫ НИЗКОТЕМПЕРАТУРНОЙ ЗАЛИВКИ
4.4. АППАРАТУРА ДЛЯ КРИОЗАЛИВКИ
4.5. ОБЕЗВОЖИВАНИЕ
4.6. ДЕГИДРАТАНТЫ
4.7. ПРОПИТЫВАНИЕ
4.8. НИЗКОТЕМПЕРАТУРНАЯ ПОЛИМЕРИЗАЦИЯ С ПОМОЩЬЮ УФО
4.9. ХИМИЧЕСКАЯ ПОЛИМЕРИЗАЦИЯ
4.10. КРИОЗАЛИВКА И ФИКСАЦИЯ
4.11. КРИОЗАЛИВКА, ГИСТОХИМИЧЕСКИЙ И ИММУНО-ЭМ АНАЛИЗ
4.12. АРТЕФАКТЫ, ВОЗМОЖНЫЕ НЕУДАЧИ И ИХ ПРИЧИНЫ
5.1. ЗАТАЧИВАНИЕ БЛОКОВ
5.1.1. Ручное затачивание
5.1.2. Механическое затачивание
5.2. НОЖИ ДЛЯ УЛЬТРАТОМИИ
5.2.1. Алмазные ножи
5.2.1.1. Очистка алмазных ножей
5.2.2. Сапфировые ножи
5.2.3. Стеклянные ножи
5.2.3.1. Выбор стекла для ножей
5.2.3.2. Изготовление стеклянных ножей
5.2.3.3. Оценка качества стеклянного ножа
5.2.3.4. Хранение стеклянных ножей
5.2.3.5. Ножи Ральфа
5.3. ИЗГОТОВЛЕНИЕ ВАННОЧЕК
5.4. УЛЬТРАТОМИЯ
5.4.1. Ультратомы
5.4.2. Общие правила работы на ультратомах
5.4.3. Установка объекта
5.4.4. Ориентация блоков
5.4.5. Установка и подведение ножа
5.4.6. Начало резания
5.4.7. Скорость резания
5.4.8. Способы расправления УС
5.4.9. Определение толщины УС
5.5. СПОСОБЫ УЛУЧШЕНИЯ КАЧЕСТВА БЛОКОВ
5.6. СОБИРАНИЕ УС
5.7. ПРОБЛЕМЫ УЛЬТРАТОМИИ, ИХ ПРИЧИНЫ И СПОСОБЫ УСТРАНЕНИЯ
5.8. ПОЛУЧЕНИЕ УС БЕЗ ЗАЛИВКИ
5.9. ХРАНЕНИЕ УС
5.10. ОСОБЕННОСТИ ИЗГОТОВЛЕНИЯ УС ИЗ АКРИЛОВЫХ ЗС
5.11. УС ИЗ ПОЛИЭТИЛЕНГЛИКОЛЯ (ПЭГ)
5.12. ПОЛУТОНКИЕ СРЕЗЫ (ПС)
5.12.1. Процедура получения ПС
5.12.2. Вылавливание ПС из ванночки
5.12.3. Расправление ПС
5.12.4. Высушивание ПС
5.12.5. Увеличение адгезии ПС к стеклу
5.12.6. Окрашивание ПС
5.12.7. Заключение ПС
5.12.8. Исследование ПС в ТЭМ
5.12.9. Изготовление УС из ПС
Рис. 23. Схема перезаливки ПС (1) со стекла (2) в блоки (3).
5.12.10. ПС из акрилатов
6.1. АППАРАТУРА ДЛЯ КРИОУЛЬТРАТОМИИ
6.2. ОСНОВНЫЕ ЭТАПЫ КРИОУЛЬТРАТОМИИ
6.2.1. Фиксация и обработка криопротекторами
6.2.2. Механизмы криоультратомии
6.2.3. Параметры резания
6.3. ПРОЦЕДУРА ПОЛУЧЕНИЯ КРИО-УС
6.3.1. "Сухой" способ сбора крио-УС
6.3.2. "Влажный" способ сбора крио-УС
6.4. ИЗГОТОВЛЕНИЕ КРИО-ПС
7.1. ОПОРНЫЕ СЕТОЧКИ
7.1.1. Очистка сеточек
7.1.2. Повторное использование сеточек
7.2. ПРИМЕНЕНИЕ СЕТОЧЕК БЕЗ ПОДЛОЖКИ
7.3. ПЛЕНКИ-ПОДЛОЖКИ
Таблица 3. Свойства подложек.
Тип подложки |
Прозрачность |
Прочность |
Устойчивость |
|
к электронам |
химическая |
|||
Коллодиевая |
Большая |
Низкая |
Низкая |
Низкая |
Формваровая |
" |
" |
" |
" |
Углеродная |
Средняя |
Высокая |
Очень высокая |
Очень высокая |
Кварцевая |
Малая |
Средняя |
Средняя |
Высокая |
7.3.1. Методы изготовления подложек 7.3.1.1. Коллодиевые подложки
7.3.1.2. Формваровые подложки
7.3.1.3. Дырчатые подложки
7.3.1.4. Углеродные подложки
7.3.2. Повышение адгезивности поверхности подложек
8.1. ВЕЩЕСТВА, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ ПОЗИТИВНОГО КОНТРАСТИРОВАНИЯ
8.1.1. Уранилацетат (УА)
8.1.2. Ионы свинца
8.1.3. Другие соли
8.2. СПОСОБЫ КОНТРАСТИРОВАНИЯ
8.2.1. Контрастирование в блоках
8.2.2. Контрастирование УС
8.2.2.1. Процедура контрастирования
8.2.2.2. Контрастирование с помощью ЦС
8.2.2.3. Многокомпонентное контрастирование
8.3. УСЛОВИЯ КОНТРАСТИРОВАНИЯ
8.4. ПРИМЕНЕНИЕ МОРДАНТОВ
8.5. НЕГАТИВНОЕ КОНТРАСТИРОВАНИЕ
8.5.1. Красители для негативного контрастирования
Таблица 4. Вещества, используемые для негативного контрастирования
Соль |
Концентрация, % |
Для контрастирования следующих структур |
Молибденацетат |
1-3 |
Мембраны, субъединицы ферментов, клеточные фракции |
ФВК |
0.5-2 |
Вирусы, бактерии, клеточные фракции, замороженные срезы, макромолекулы (ДНК, актин, ферменты) |
УА |
0.5-2 |
То же |
Уранилмагнезиумацетат |
1 |
То же |
Уранилоксалат |
0.012 М |
Небольшие макромолекулы |
Уранилформат |
0.5-2 |
То же |
8.5.2. Приготовление негативных контрастеров
8.5.3. Общая схема негативного контрастирования
8.5.3.1. Метод капли
8.5.3.2. Метод флотации
8.5.3.3. Метод распыления
8.6. КОНТРАСТИРОВАНИЕ ПРИ КРИОЗАЛИВКЕ
8.7. КОНТРАСТИРОВАНИЕ КРИО-УС
8.8. АРТЕФАКТЫ, ВОЗНИКАЮЩИЕ ПРИ КОНТРАСТИРОВАНИИ
8.8.1. Артефакты микроскопии
9.1. ВВОДНЫЕ ЗАМЕЧАНИЯ
9.2. ЭМ-ГИСТОХИМИЯ ФЕРМЕНТОВ
9.2.1. Методы осаждения металлов при выявлении гидролитических ферментов
9.2.2. Применение ионов церия - новый шаг в ЭМ-гистохимии
9.2.3. Условия проведения гистохимических реакций в ЭМ
9.2.4. Фиксация и активность ферментов
9.2.5. Контроль
9.3. МЕТОДЫ УДАЛЕНИЯ ВЕЩЕСТВ ИЗ ТКАНЕЙ
9.4. МЕТОДЫ СПЕЦИФИЧЕСКОГО ОКРАШИВАНИЯ
9.5. СУБСТРАТНАЯ ЭНЗИМОГИСТОХИМИЯ
10.1. ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ
10.2. РАЗРЕШЕНИЕ
10.3. ПЛАНИРОВАНИЕ ЭКСПЕРИМЕНТА
10.4. УСЛОВИЯ ЭМ-АРГ
10.5. МЕТОД ЭМУЛЬСИОННОЙ ЭМ-АРГ
10.5.1. Нанесение эмульсии
10.5.1.1. Метод погружения
10.5.1.2. Метод проволочной петли
10.5.2. Экспонирование
10.5.3. Проявление
10.5.4. Контрастирование
10.5.5. Оценка результатов
10.6. МЕТОД АДСОРБЦИОННОЙ ЭМ-АРГ
10.7. СЭМ и ЭМ-АРГ
11.1. ЛЕКТИНЫ, ИХ СВОЙСТВА И СПЕЦИФИЧНОСТЬ
11.2. ПУТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ МЕЧЕНЫХ ЛЕКТИНОВ
11.3. МАРКЕРЫ ЛЕКТИНОВ
11.4. СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ МЕЧЕНЫХ ЛЕКТИНОВ
11.5. ПРИНЦИПЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ МЕЧЕНЫХ ЛЕКТИНОВ В ЭМ
11.5.1. Фиксация
11.5.2. Методы визуализации мишеней с помощью лектинов
11.5.2.1. Прямые методы
11.5.2.2. Непрямые методы
11.5.3. Контроля
11.5.4. Методы обработки объектов
11.6. МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ ЭНДОГЕННЫХ ЛЕКТИНОВ
12.1. ОСНОВНЫЕ ПОНЯТИЯ
12.2. МЕТОДЫ ДЕТЕКТИРОВАНИЯ АНТИГЕНОВ
12.2.1. Метод меченого антигена
12.2.2. Метод с протеином А или G
12.2.3. Метод санидином (стрептавидином)
12.2.4. Метод с комплексом пероксидаза-антипероксидаза (ПАП)
12.2.5. Метод динитрофенол-гаптенового сандвича
12.3. ХАРАКТЕРИСТИКА АНТИТЕЛ
12.4. МАРКЕРЫ
12.5. МЕТОДЫ ПРЕПАРИРОВАНИЯ В ИММУНО-ЭМ
12.5.1. Крио-УС в иммуно-ЭМ
12.5.1.1. Иммуномечение
12.5.2. Преэмбедцинг
12.5.2.1. Фиксация и хранение объектов
12.5.2.2. Пермеабилизация
12.5.2.3. Иммуномечение и заливка
12.5.3. Постэмбеддинг
12.5.3.1. Использование гидрофобных ЗС
12.5.3.2. Использование гидрофильных акрилатов
12.5.4. Условия проведения иммуномечения
12.5.5. Процедура иммуномечения
12.5.6. Промывание
12.5.7. Контрастирование и просмотр в ТЭМ
12.5.8. Одновременное исследование ПС и УС
12.5.9. Иммуно-СЭМ
12.5.10. Комплексные реакции
12.5.11. Оценка результатов иммуно-ЭМ
12.5.12. Неспецифическое мечение
12.5.13. Способы снижения фона
12.6. ОСНОВНЫЕ КОНТРОЛЬНЫЕ РЕАКЦИИ
12.7. ВОЗМОЖНЫЕ НЕУДАЧИ В ИММУНО-ЭМ, ИХ ПРИЧИНЫ И ПУТИ УСТРАНЕНИЯ
13.1. СУЩНОСТЬ МЕТОДА
13.2. ОСОБЕННОСТИ ПРЕПАРИРОВАНИЯ
13.3. ЗОНДЫ
13.3.1. ДНК-зонды
13.3.2. РНК-зонды
13.3.3. Олигонуклеотидные зонды
13.4. МАРКЕРЫ
13.4.1. Процедура мечения
13.4.1.1. Реакция НИК-трансляции
13.4.1.2. Метод удлинения ДНК-зонда от "матрицы" (primer extension)
13.4.1.3. Одноцепочечный однородно меченный ДНК-зонд
13.4.1.4. Мечение концов олигонуклеотидных зондов
13.4.1.5. Транскрипция in vitro РНК-зондов
13.4.1.6. Прямое мечение
13.4.2. Выбор меченого зонда
13.5. УСЛОВИЯ ПРОВЕДЕНИЯ ГИБРИДИЗАЦИИ IN SITU
13.5.1. Пермеабилизация
13.5.2. Процедура постгибридизации
13.5.3. Детектирование радиоактивных зондов
13.6. ПРОЦЕДУРА ГИБРИДИЗАЦИИ IN SITU
13.6.1. Преэмбеддинг
13.6.2. Постэмбеддинг
13.7. СИНТЕЗ ЗОНДОВ IN SITU
13.7.1. Гибридизация с использованием радиационных зондов
13.8. СПЕЦИФИЧНОСТЬ МЕТОДА
13.8.1. Неспецифическое связывание
13.8.2. Интерпретация и артефакты
13.8.3. Меры предосторожности
14.1. ВЫБОР ТРЕЙСЕРА
14.2. ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ТРЕЙСЕРЫ
Микропероксидаза |
1900 |
Лактопероксидаза быка |
82000 |
Цитохром С |
12000 |
Миелопероксидаза человека |
160000 |
Пероксидаза хрена |
40000 |
Каталаза из печени коровы |
240000 |
Бычий гемолобин |
64500 |
Ферритин |
500000 |
14.2.1. Частицы
14.2.2. Кристаллоиды
14.2.3. Ферменты
14.2.4. Коллоидные растворы
14.3. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА
15.1. ИЗГОТОВЛЕНИЕ РЕПЛИК
15.2. ВЕЩЕСТВА, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ НАПЫЛЕНИЯ
15.3. ПОЛУЧЕНИЕ ПЛЕНОК ИСПАРЕНИЕМ ВЕЩЕСТВ В ВАКУУМЕ
15.3.1. Испарение углерода
15.3.2. Методы распыления других веществ
15.3.3. Процессы, происходящие во время напыления
15.3.4. Измерение толщины пленок
,
15.3.5. Процедура получения реплик
15.3.6. Анализ изображений
.
.
,
15.3.7. Ротационное оттенение объектов
15.4. РЕПЛИКИ МАКРОМОЛЕКУЛ
16.1. ЭТАПЫ ПРЕПАРИРОВАНИЯ
16.1.1. Очистка реплик
16.2. МЕМБРАННЫЕ ПОВЕРХНОСТИ
16.3. СОЧЕТАНИЕ ЗАМОРАЖИВАНИЯ-СКАЛЫВАНИЯ С ДРУГИМИ МЕТОДАМИ АНАЛИЗА
16.3.1. Иммуноцитохимический анализ и использование лектинов
16.3.2. Выявление липидов
16.3.3. Криоавторадиография
16.4. АРТЕФАКТЫ
17.1. МАКРОМОЛЕКУЛЫ
17.2. ИССЛЕДОВАНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ И РАСТИТЕЛЬНЫХ КЛЕТОК
17.2.1. Тотальные препараты
17.3. МЕТОДЫ ОЧИСТКИ ОБЪЕКТОВ
17.4. МЕТОД ПСЕВДОРЕПЛИК
17.5. ИССЛЕДОВАНИЯ ОСАДКОВ, МАЗКОВ И КЛЕТОЧНЫХ МОНОСЛОЕВ
17.5.1. Культура ткани
17.6. СОЧЕТАНИЕ РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДОВ СМ И ЭМ НА ОДНОМ ОБЪЕКТЕ
17.6.1. Топическая ЭМ
17.6.2. ТЭМ после СМ
17.6.3. СМ после ТЭМ
17.6.4. СЭМ после CM
17.6.5. ТЭМ после СЭМ
17.6.6. СЭМ после ТЭМ
17.7. ВЫСОКОВОЛЬТНАЯ ЭМ
17.7.1. Подготовка объектов для ВТЭМ
18.1. ПОСМЕРТНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ
18.1.1. Иссечение объектов
18.2. ОБЕЗВОЖИВАНИЕ И ВЫСУШИВАНИЕ
18.2.1. Высушивание из жидкого состояния
18.2.2. Высушивание путем перехода критической точки
Таблица 5. Физические свойства веществ, используемых для ВКТ
Вещество |
Критическая температура,®С |
Критическое давление, атм |
CO2 |
31.1 |
72.8 |
N20 |
36.5 |
71.4 |
Фреон-13 |
28.9 |
38.2 |
18.2.3. Лиофильная сушка (высушивание из твердого состояния)
18.3. МОНТИРОВАНИЕ
18.3.1. Создание электропроводящего покрытия
18.4. ПРОСМОТР ПРЕПАРАТОВ
18.5. МАРКИРОВАНИЕ МЕЖКЛЕТОЧНЫХ КОНТАКТОВ
19.1. КЛАССИФИКАЦИЯ МЕТОДОВ ФХД
19.2. МЕТОДЫ ВИЗУАЛИЗАЦИИ ВНУТРИКЛЕТОЧНЫХ СТРУКТУР
19.2.1. Вскрытие клеток
19.2.2. Детергентно-экстрагированные препараты
19.3. МЕТОДЫ ОБНАЖЕНИЯ НЕСВОБОДНЫХ КЛЕТОЧНЫХ ПОВЕРХНОСТЕЙ
19.4. МЕТОДЫ ВИЗУАЛИЗАЦИИ НЕКЛЕТОЧНЫХ СТРУКТУР
20.1. МЕТОД СЭМКП СОСУДИСТОГО РУСЛА
20.1.1. Подготовка сосудистого русла
20.1.2. Заполнение кровеносного русла инъекционной массой
20.1.3. Инъекционные массы
20.1.3.1. Очистка метилметакрилата
20.1.3.2. Приготовление предполимера ММА
20.1.4. Полимеризация
20.1.5. Коррозия тканевых объектов
20.1.6. Микродиссекция объектов
20.1.7. Подготовка слепков для исследования в СЭМ
20.2. СЭМ-АНАЛИЗ
20.3. СПЕЦИАЛЬНЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ ПРИЕМЫ
20.3.1. Маркировка межклеточных контактов
22.3.2. Дифференцировка сегментов микроциркуляторного русла
20.3.3. Одновременный анализ микрососудов с помощью СЭМКП и ТЭМ
20.4. СЭМКП ДРУГИХ ПОЛОСТЕЙ ОРГАНИЗМА
20.5. ИНТЕРПРЕТАЦИЯ ИЗОБРАЖЕНИЙ
21.1. БИОЛОГИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ
21.2. ВИРУСНЫЕ МАРКЕРЫ
21.3. ФЕРМЕНТЫ
21.3.1. Пероксндаза хрена (ПХ)
21.3.2. Щелочная фосфатаза и гпюкооксидаза
21.4. СИНТЕТИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ
21.5. КОЛЛОИДНОЕ ЗОЛОТО (КЗ)
21.5.1. Физико-химические основы получения комплексов белка с КЗ
21.5.1.1. Получение КЗ
21.5.1.2. Измерение величины частиц КЗ
21.5.1.3. Стабилизация коллоида
21.6. СПОСОБЫ ПРОВЕДЕНИЯ РЕАКЦИЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ КЗ
21.6.1. Конъюгирование макромолекул с КЗ
21.6.2. Особенности ЭМ-выявления КЗ
21.7. АРТЕФАКТЫ
21.8. НЕТРАДИЦИОННЫЕ СПОСОБЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ КЗ
21.9. СЕРЕБРЯНОЕ УСИЛЕНИЕ
21.9.1. Процедура серебряного усиления
21.9.2. Используемые реактивы
21.9.3. Возможные опасности
21.9.4. Преимущества и недостатки
22.1. МЕХАНИЗМЫ ДЕТЕКТИРОВАНИЯ СИГНАЛОВ
22.2. ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЕТЕКТОРЫ
22.3. РЕНТГЕНОВСКИЙ МИКРОАНАЛИЗ (РМА)
22.3.1. Возможности метода
22.3.2. Подготовка объектов для РМА
22.3.3. Количественная оценка результатов
Cx=Ix/Ixs,
Cx=Ix/IxsZAF,
Cx=KIx/Iw.
22.3.4. Основные ошибки при количественной оценке
22.4. СПЕКТРОМЕТРИЯ ЭНЕРГЕТИЧЕСКИХ ПОТЕРЬ ЭЛЕКТРОНОВ
1.2 Расчет осмолярности
2. РАСТВОРЫ
2.1. Солевые растворы
2.1.1. Молярность изотонических растворов [253]
NaCl 0,16 М MgCl2 0,11 М
КCl 0,16 М Na2HP04 0,13 М
Na2HPO4 0,16 М Глюкоза 0,30 М
СаCl2 0,12 М Сахароза 0,29 М
2.1.2. Забуференный фосфатным буфером физраствор (ФБФР) [253]
2.1.3. Физиологический раствор, забуференный Трис-буфером
2.1.4. Раствор Рингера для млекопитающих [253]
2.1.5. Раствор Рингера для амфибий [253]
2.1.6. Раствор Тироде [253]
2.2. Буферные растворы
2.2.1. Na-K-фосфатный буфер (ФБ) Соренсена [253]
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
2.2.2. Изотонический Na-ФБ [253]
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
2.2.3. Растворы Na-ФБ разной молярности [253]
pH |
6,0 |
6,2 |
6,4 |
6,8 |
7,0 |
7,2 |
7,4 |
7,6 |
7,8 |
8,0 |
А, мл |
87,7 |
81,6 |
73,5 |
51,0 |
39,0 |
28,0 |
19,0 |
13,0 |
8,5 |
5,30 |
Б, мл |
12,3 |
18,4 |
26,5 |
49,0 |
61,0 |
72,0 |
81,0 |
87,0 |
91,5 |
94,7 |
pH |
6,4 |
6,8 |
7,0 |
7,2 |
7,4 |
7,6 |
7,8 |
8,0 |
А: NaН2PО4 "Н2О, г |
1,0 |
0,7 |
0,54 |
0,39 |
0,26 |
0,18 |
0,12 |
0,07 |
Б: Na2НPО4 "Н2О или Na2НPО4 "12Н2О, г |
0,71 0,95 |
1,31 1,75 |
1,63 2,18 |
1,93 2,58 |
2,17 2,9 |
2,32 3,1 |
2,46 3,28 |
2,54 3,39 |
2.2.4. Какодилатный буфер (КБ) [253]
рН |
6.4 |
6.6 |
6.8 |
7.0 |
7.2 |
7.4 |
Б, мл |
9.2 |
6.7 |
4.7 |
3.2 |
2.1 |
1.4 |
2.2.5. 0,2 М коллидиновый буфер (рН 7.4)
2.2.6. Трис-HCI буфер
РН |
7.19 |
7.36 |
7.54 |
7.66 |
7.77 |
7.87 |
7.96 |
8.05 |
8.14 |
Б, мл |
45.0 |
42.5 |
40,0 |
37.5 |
35.0 |
32.5 |
30,0 |
27.5 |
25.0 |
рН |
8.23 |
8.32 |
8.41 |
8.51 |
8.62 |
8.74 |
8.92 |
9.10 |
Б, мл |
22.5 |
20,0 |
17.5 |
15.0 |
12.5 |
10,0 |
7.5 |
5.0 |
2.2.7. 0,2 М Трис-малеатный буфер
рн |
5.8 |
6.0 |
6.2 |
6.4 |
6.6 |
6.8 |
7.0 |
7.2 |
Б, мл |
10,3 |
13.0 |
15.8 |
18.5 |
21.3 |
22.5 |
24.0 |
25.5 |
рН |
7.4 |
7.6 |
7.8 |
8.0 |
8.2 |
8.4 |
8.6 |
Б, мл |
27.0 |
29.0 |
31.8 |
34.5 |
37.5 |
40,5 |
43.3 |
2.2.8. Натрий-малеатный буфер [253]
рН |
5.2 |
5.4 |
5.6 |
5.8 |
6.0 |
6.2 |
6.4 |
6.6 |
6.8 |
Б, мл |
7.2 |
10,5 |
15.3 |
10,8 |
26.9 |
33.0 |
38.0 |
41.6 |
44.4 |
2.2.9. Вероналовый буфер [253]
рН |
6.8 |
7.0 |
7.2 |
7.4 |
7.6 |
А, мл |
52.2 |
53.6 |
55.4 |
58.1 |
61.5 |
2.2.10. 0,028 М вероналацетатный буфер [253]
рН |
3.0 |
4.0 |
5.0 |
6.0 |
6.8 |
7.0 |
7.2 |
7,4 1 |
А, мл |
20,0 |
20,0 |
20,0 |
20,0 |
20,0 |
20,0 |
20,0 |
20,0 |
Б, мл |
61.6 |
50,2 |
35.2 |
28.4 |
25.6 |
24.2 |
22.6 |
20,2 |
В, мл |
8.0 |
8.0 |
8.0 |
8.0 |
8.0 |
8.0 |
8.0 |
8.0 |
2.2.11. 0,3 М пиперазиновый буфер [253]
2.2.12. Ацетатный буфер [253]
рн |
3.6 |
3.8 |
4.0 |
4.2 |
4.4 |
4.6 |
4.8 |
5.0 |
5.2 |
5.4 |
5.6 |
А, мл |
46.3 |
44.0 |
41.0 |
36.8 |
30,5 |
25.5 |
20,0 |
14.8 |
10,5 |
8.8 |
4.8 |
Б, мл |
3.7 |
6.0 |
9.0 |
13.2 |
19.5 |
24.5 |
30,0 |
35.2 |
39.5 |
41.2 |
45.2 |
2.2.13. Буфер Мак-Ильвейна (Na-фосфатцитратный)
рн |
4.0 |
4.2 |
4.4 |
4.8 |
5.0 |
5.2 |
5.4 |
5.6 |
5.8 |
6.0 |
А, мл |
7.7 |
8.3 |
8.8 |
9.4 |
10,3 |
10,7 |
11.2 |
11.6 |
12.1 |
12.6 |
Б, мл |
12.3 |
11.7 |
11.2 |
10,6 |
9.7 |
9.3 |
8.8 |
8.4 |
7.9 |
7.4 |
рн |
6.2 |
6.4 |
6.6 |
6.8 |
7.0 |
7.2 |
7.4 |
7.6 |
7.8 |
8.0 |
А, мл |
13.2 |
13.9 |
14.6 |
15.5 |
16.5 |
17.4 |
18.2 |
18.7 |
19.2 |
19.5 |
Б, мл |
6.8 |
6.1 |
5.4 |
4.5 |
3.5 |
2.6 |
1.8 |
1.3 |
0,8 |
0,5 |
2.2.14. 0,2 М хроматный буфер
3. ФИКСАЦИЯ
3.1. Схема препарирования объектов для ТЭМ [253]
Процедура |
Длительность процедуры, мин |
||
минимум |
оптимум |
максимум |
|
|
10-60 |
90 |
24 ч |
|
10 |
30 |
24 ч |
|
60 |
90 |
24 ч |
|
10 |
30 |
24 ч |
|
|||
|
1 |
5 |
30 |
|
1 |
5 |
30 |
|
1 |
5 |
На ночь |
|
1 |
5 |
-"- |
|
5 раз по 3 |
5 раз по 6 |
-"- |
|
5 |
10 |
-"- |
|
5 |
10 |
-"- |
|
24-48 ч |
3.1. Агаровый гель для контроля за температурой фиксации
3.2. Очистка ГА
3.3. Регенерация ЧО
3.4. Приготовление раствора ФА
3.5. Фиксаторы на основе ГА
3.6. Фиксаторы на основе ФА
3.7. Фиксаторы на основе ЧО
3.7.1. ЧО с двухромовокислым калием[253]
3.7.2. Фиксатор Милонига
3.8. Фиксаторы на основе акролеина
3.8.1. 10%-ный акролеин на ФБ [253]
3.9. Смешанные фиксаторы
3.9.1. Фиксатор Карновского
3.9.2. Разведенный фиксатор Карновского
3.9.3. Фиксатор с акролеином
3.9.4. Фиксатор:1 акролеин + ФА + ГА + ДМСО [253]
3.9.5. Фиксатор: ГА + ФА + акролеин + УА
3.10. СПЕЦИАЛЬНЫЕ ФИКСАТОРЫ
3.10.1. ЧО + феррицианид натрия
3.10.2. ЧО + ферроцианид калия
3.10.3. Фиксатор для выявления гликозаминогликанов
3.10.4. Фиксатор для выявления липидов
3.10.5. ГА + таниновая кислота
3.10.6. Обработка таниновой кислотой
3.10.7. ГА + лизин
3.10.8. Перйодат + лизин + ФА [246]
3.10.9. Фиксатор для МВИ
3.10.10. Фиксатор для перфузии и иммуно-ЭМ [281]
3.10.11. Фиксатор для иммуно-ЭМ
3.10.12. Фиксатор для иммуно-ЭМ и МВИ [255]
3.10.13. Постфиксационная обработка ТК [323]
4. ЗАЛИВКА
4.1 Свойства основных компонентов эпоксидных смол [156]
Название |
Молекулярная масса |
Вязкость, сП |
Плотность, г/мл |
ВПЕ |
ДДСА (DDSA) |
266 |
290-295 |
1.0 |
- |
МНА (MNA) |
178 |
225-275 |
1.24 |
- |
НСА (NSA) |
224 |
117-120 |
1.00-1.05 |
- |
ГХСА (HXSA) |
182 |
20-26 |
1.00-1.10 |
- |
ОСА (OSA) |
210 |
32 |
1.00 |
- |
Аралдит М (Araldit) |
- |
1300-1650 |
1.1-1.15 |
226-242 |
Аралдит MY 753 |
- |
1800-2800 |
1.13-1.17 |
219-235 |
Аралдит 502 |
- |
2100-3600 |
1.13-1.17 |
222-238 |
Эпон 812 (Ероп) |
- |
120-210 |
1.15-1.22 |
145-160 |
Г ТААБ (ТааЬ) |
- |
- |
1.11 |
- |
ДЕР 732 (DER) |
- |
- |
1.07 |
- |
Мараглас 655 (Maraglas) |
- |
- |
1.19 |
- |
Дибутилфталат |
- |
- |
1.04 |
- |
БДМА (DDMA) |
- |
- |
0.93 |
- |
ДМАЕ или Сl (DMAE, S1) |
- |
- |
0.9 |
335 |
4.2. Стандартные заливочные смеси эпона и аралдита [156]
Название компонента |
Аралдит, мл(г) |
Эпон, мл(г) |
Эпон+Аралдит, мл(г) |
||
А |
Б |
В |
|||
Аралдит |
19.0(22.0) |
- |
- |
- |
12.0(14.0) |
Эпон |
- |
20.0(24.0) |
20.0(24.0) |
20.0(24.0) |
20.0(24.0) |
ДДСА |
21.0(21.0) |
22.0(22.0) |
16.0(16.0) |
9.0(9.0) |
50.0(50.0) |
МНА |
- |
5.0(6.0) |
8.0(10.0) |
12.0(15.0) |
- |
БДМА |
1.2(1.3) |
1.4(1.5) |
1.3(1.5) |
1.2(1.4) |
2.5(2.6) |
ДБФ* |
0.6(0.6) |
- |
- |
- |
0.4(0.4) |
4.3. Стандартная схема заливки объектов в эпоксидные смолы [156]
N п/п |
Этап |
Длительность этапа |
1 |
Обезвоживание в 100%-ном этаноле |
30 мин |
2 |
Замещение этанола его смесью с окисью пропилена (1 : 1) |
10 мин |
3 |
Инфильтрация чистой окисью пропилена |
10 мин |
4 |
Инфильтрация смесью смолы и окиси пропилена (1 : 1) |
1-2 ч |
5 |
Инфильтрация полной заливочной смесью эпоксидной смолы |
На ночь |
6 |
Инфильтрация полной заливочной смесью эпоксидной смолы |
2-4 ч |
7 |
Полимеризация при t=60®С |
24-48 ч |
4.4. Ускоренное обезвоживание и пропитывание
4.5. Заливочная среда ТААБ [253]
Компонент |
Количество компонента, мл |
||
А |
Б |
В |
|
ТААБ (смола) |
20.0 |
20.0 |
20.0 |
ДДСА (пластификатор) |
20.0 |
10.0 |
2.0 |
МНА (отвердитель) |
|
10.0 |
18.0, |
Все смеша т ь |
|||
БДМА (акселератор) |
1.2 |
1.2 |
1.2 |
Время полимеризации, ч |
24-48 |
4.6. Заливка в смолу с низкой вязкостью (СПЕРРА) [336]
|
|
||||
|
А |
Б |
В |
Г |
Д |
ЕРЛ 4206 (ERL 4206) (смола) |
10.0 |
10.0 |
10.0 |
10.0 |
10.0 |
ДЕР 736 (пластификатор) |
6.0 |
4.0 |
8.0 |
6.0 |
6.0 |
НСА (отвердитель) |
26.0 |
26.0 |
26.0 |
26.0 |
26.0 |
ДМАЕ (акселератор) |
0.4 |
0.4 |
0.4 |
1.0 |
0.2 |
Общее количество |
42.4 |
40.4 |
44.4 |
43.0 |
42.2 |
Время полимеризации, ч (t=37®С) |
8 |
8 |
8 |
3 |
16 |
Сохранность ЗС, сут |
3-4 |
3-4 |
3-4 |
2 |
7 |
4.7. Заливочная смесь Мараглас + Кардолит
4.8. Заливочная среда Вестопал В [253]
4.9. Заливочная среда Д.Е.Р. (D.E.R.) [253]
Компонент |
Количество компонента, мл |
||
А |
Б |
В |
|
ДЕР 332 (нагреть до 60®С) |
7 |
6 |
7 |
ДЕР 732 |
3 |
3 |
2 |
ДДСА |
5 |
10 |
5 |
Все смешать |
|||
БДМА |
0.45 |
0.57 |
0.42 |
4.10. Заливочная смесь ЕРЛ 4206 [253]
Компонент |
Количество компонента, г |
||
А |
Б |
В |
|
ЕРЛ 4206 (ERL 4206) |
20 |
20 |
20 |
ДЕР 736 |
16 |
12 |
8 |
НСА |
52 |
52 |
52 |
Все смешать |
|||
ДМАЕ (в зависимости от продолжительности полимеризации) при t=70®С |
|||
16 ч |
0.4 г (1% или 1 капля на 2 г смеси) |
||
8 ч |
0.8 г (2% или 1 капля на 1 г смеси) |
||
3 ч |
2.0 г (5%, или 5 капель на 2 г смеси) |
4.11. Заливка в полиэтиленгликоль (ПЭГ)
4.11.1. Монтирование срезов, залитых в ПЭГ
4.13. Замещение воды в замороженном состоянии
5. НИЗКОТЕМПЕРАТУРНОЕ ПРЕПАРИРОВАНИЕ ОБЪЕКТОВ ДЛЯ НИЗКОТЕМПЕРАТУРНОЙ ЗАЛИВКИ
5.1. Состав смол [109]
5.2. Обезвоживание и заливка в Ловикрил К4М
5.3. Заливка в Ловикрил КИМ
5.4. Заливка в Ловикрил НМ23
5.5. Заливка в ЛР ВАЙТ (LR WHITE) [224]
5.6. Заливка в ЛР ГОЛД (LR GOLD)
5.7. Заливка в гликольметакрилат (ГМА)
6. УЛЬТРАТОМИРОВАНИЕ
6.1. Материалы, необходимые для изготовления УС
6.2. Изготовление ПС
6.3. Укрепление ПС на стеклах
6.3.1. Адгезивные смеси
6.4. Монохромные красители
6.4.1. Одноступенчатые методы окрашивания ПС
6.4.2. Толуидиновый синий (ТС)
6.4.3. Метиленовый синий
6.4.4. Сафранин
6.4.5. Окраска гематоксилином
6.4.6. Метод ШИК
6.4.7. Метенамин серебра
6.4.8. Перегревание ПС
6.5. Полихромные красители
6.5.1. Трехцветное окрашивание
6.5.2. Двойное окрашивание ПС
|
Раствор А |
Раствор Б |
|
30 мин |
30-90 с |
|
30-60 мин и более |
1-3 мин |
|
5 мин |
1 мин |
|
20 мин |
1-5 мин |
6.5.3. Толуидиновый синий и метиленовый синий [253]
6.5.4. Толуидиновый синий и азур II [253]
6.5.5. Толуидиновый синий и пиронин [253]
6.5.6. Толуидиновый синий и основной фуксин [253]
6.5.7. Метиленовый синий и азур II
6.6. Смеси для травления ПС
6.6.1. Подкисленный раствор перекиси водорода
6.6.2. Раствор йодной кислоты
6.6.3. Раствор таниновой кислоты (ТК)
6.6.4. Раствор метоксида натрия
6.6.5. Раствор этоксида натрия
6.6.6. Обработка парами брома
7. КРИОУЛЬТРАТОМИЯ
7.1. Напыление стеклянных ножей вольфрамом
7.2. Криоультратомия "сухим" способом
7.2.1. Перенос крио-УС "сухим способом"
7.2.2. Метод "сухой нож - влажный перенос"
8. КОНТРАСТИРОВАНИЕ
8.1. Приготовление воды, свободной от СО2
8.2. Контрастирование кусочков с помощью УА перед обезвоживанием
8.2.1. Контрастирующие растворы [253]
8.3. Контрастирование с помощью. УА в процессе обезвоживания
8.3.1. Спиртовой раствор УА
8.4. Контрастирование объектов в заполимеризованном блоке
8.5. Контрастирование УС
8.5.1. Контрастирование с помощью ЦС
8.5.2. Свинцовые смеси для контрастирования
8.5.2.1. Приготовление цитрата свинца (ЦС)
8.5.2.2. Сложный свинцовый контрастер
8.5.2.3. Хранение раствора ЦС
8.5.3. Контрастирование УС с помощью УА
8.5.4. Контрастирование с помощью ТК [354]
8.5.5. Контрастирование акриловых УС после иммуномечения
8.5.6. Контрастирование крио-УС
8.6. Негативное контрастирование (НК)
8.6.1. Контрастирование взвесей
8.6.2. Контрастеры для НК
9. ГИСТОХИМИЯ
9.1. Выявление фосфатаз свинцовым методом
9.1.1. Инкубационные среды (ИС) [253] ИС на кислую фосфатазу.
9.2. Выявление активности ферментов цериевым методом [119]
9.2.1. Инкубационные среды [119]
9.3. Выявление цитохромоксидазы
9.4. Выявление каталазы [119]
9.5. Выявление пероксидазы [119]
9.6. Выявление глюкозо-6-фосфатдепвдрогеназы
9.7. Выявление холинэетеразы
9.8. Выявление дипептидилпептидаз
9.8.1. Приготовление гексазотированного парарозанилина
9.9. Окрашивание купролиновым голубым (Cuprolinic Blue)
9.10. Окрашивание рутениевым красным (РК)
9.11. Выявление анионных сайтов
9.12. Окрашивание базальных мембран, коллагеновых волокон и гликогена на УС [249]
9.12.1. Раствор метенамина серебра
9.13. Выявление элементов эндоплазматической сети [95]
9.14. Выявление аргентаффинных клеток и биогенных аминов
10. АВТОРАДИОГРАФИЯ
10.1. ЭМ-АРГУС
10.2. Авторадиография ПС
10.3. Приготовление проявителей для ЭМ-АРГ
10.4. Абсорбционная ЭМ-АРГ
11. ЛЕКТИНЫ
11.1. Конъюгирование лектинов (Л)
11.1.1. Конъюгирование Л с КЗ
11.1.2. Конъюгирование Л зародышей пшеницы (WGA) с КЗ [312]
11.1.3. Конъюгирование Л с ферритином
11.1.4. Конъюгирование Л с ПХ
11.2. Визуализация лектиновых рецепторов в ТЭМ
11.2.1. Прямой метод с ферритином
11.2.2. Прямой метод с КЗ
11.3. Постэмбеддинг. Мечение УС пектинами
11.3.1. Прямой метод
11.3.2. Непрямой метод
11.4. Мечение пектинами крио-УС или изолированных клеток
11.5. Визуализация лектиновых рецепторов эндотелия в СЭМ
11.6. Визуализация лектиновых рецепторов в СЭМ с помощью антител [178]
12. ИММУНОМЕЧЕНИЕ
12.1. Блокирование альдегидных групп на крио-УС
12.2. Иммуномечение крио-УС
12.3. Иммуномечение крио-УС с помощью биотин-авидиновой системы
12.4. Преэмбеддинг с использованием КЗ в качестве маркера
12.5. Преэмбеддинг с ПХ [332]
12.6. Постэмбеддинг
12.6.1. Прямой метод с использованием акриловых УС
12.6.2. Непрямой метод с использованием акриловых УС [115]
12.6.3. Непрямой метод с использованием эпоксидных УС
12.6.3.1. Травление УС
12.7. Иммуномечение поверхности клеток для СЭМ
13. ГИБРИДИЗАЦИЯ IN SITU
13.1. Гибридизация in situ на ПС
13.2. Гибридизация in situ радиационным способом
13.3. Гибридизация in situ с помощью биотинилированного зонда
14. ТРЕЙСЕРЫ
14.1. Исследование проницаемости с помощью ПХ
14.2. Исследование проницаемости с помощью микропероксидазы
14.3. Окрашивание коллоидным лантаном [253]
14.4. Окрашивание коллоидным никелем
14.5. Мечение поверхности объекта с помощью катионизированного ферритина [312]
15. ПОЛУЧЕНИЕ УГЛЕРОДНОЙ ПЛЕНКИ
16. ВИЗУАЛИЗАЦИЯ ХОЛЕСТЕРИНА В МЕМБРАНАХ
17. СОЧЕТАНИЕ МЕТОДОВ ЭМ
17.1. Оттенение макромолекул
17.2. Метод распластывания и оттенения молекул ДНК с помощью формамида [114]
17.3. Исследование парафиновых блоков в СЭМ и ТЭМ
17.4. Последовательное изучение объектов в СМ, СЭМ и ТЭМ [191]
17.5. Анализ объектов, подготовленных для ТЭМ, в СЭМ
17.6. Исследование объектов в СЭМ после СМ [272]
17.7. Приготовление меламиновой подложки для культивирования клеток и ЭМ [345]
17.8. Фиксация бактерий
17.9. Фиксация бактериальных клеток по Рейтеру [9]
18. СКАНИРУЮЩАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ НАТИВНЫХ ПРЕПАРАТОВ
18.1. Электропроводный клей
18.3. Выявление лимфатических сосудов в СЭМ [305]
18.4. Импрегнация межэндотелиальных границ для анализа в СЭМ
18.5. Импрегнация трупного материала
19. ИССЛЕДОВАНИЕ В СЭМ НЕСВОБОДНЫХ ПОВЕРХНОСТЕЙ
19.1. Обнажение внутренней поверхности плазмалеммы
19.2. Обнажение внутриклеточных структур с помощью осмиевой мацерации
19.3. Выявление цитоскелета [237]
19.3.1. Выявление цитоскелета эндотелия
19.3.2. Цитоскелетстабилизирующие буферы (ЦСБ) (см: [22])
19.3.3. Диссоциирующий раствор
19.3.4. Фиксатор для сохранения цитоскелета после диссоциации с помощью Тритона Х-100
19.4. Обнажение скрытых поверхностей клеток
19.5. Выявление эластического каркаса с помощью муравьиной кислоты
19.6. Выявление неклеточных структур в костях
19.7. Визуализация базальных мембран
20. СЭМ КОРРОЗИОННЫХ ПРЕПАРАТОВ
21. МАРКЕРЫ В ЭМ
21.1. Приготовление КЗ
21.2. Конъюгирование IgG с КЗ
21.3. Конъюгирование протеина А с КЗ
21.4. Серебряное усиление
21.5. Серебряное усиление после реакции на ПХ
21.5.1. Усилитель коллоидного золота
Научное издание
Миронов Александр Александрович,
Комиссарчик Ян Юдович, Миронов Владимир Александрович
МЕТОДЫ ЭЛЕКТРОННОЙ МИКРОСКОПИИ В БИОЛОГИИ И МЕДИЦИНЕ
Утверждено к печати Институтом цитологии Российской академии наук
Редактор издательства Л.С.Евстигнеева
Художник Ю.П.Амбросов Технический редактор О.Б.Мацылевич. Корректор И.А.Крайнева, А.Х.Салтанаева, С.И.Семиглазова и Г.И.Тимошенко
ЛР N 020297 от 27.11.91. Сдано в набор 22.08.94. Подписано к печати 27.12.94. Формат 60 х 90 1/16. Бумага офсетная. Гарнитура Тайме. Печать офсетная. Усл. печ. л. 25.0. Уч.-изд. л. 27.7. Тираж 390 экз. Тип. зак. N 3234. С 990.
Санкт-Петербургская издательская фирма РАН 199034, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, 1
Санкт-Петербургская типография N 1 РАН 199034, Санкт-Петербург, 9 линия, 12
|
Новые книги авторов СИ, вышедшие из печати:
О.Болдырева "Крадуш. Чужие души"
М.Николаев "Вторжение на Землю"